Определение фибриногена в плазме крови методика

Определение фибриногена в плазме крови методика

Определение концентрации фибриногена в клинической практике проводят для оценки системы гемостаза, острофазного ответа и риска развития сердечно-сосудистых заболеваний. Референтный диапазон его концентрации составляет 2,0-4,0 г/л и практически не зависит от пола и возраста, а при тяжелых бактериальных инфекциях, травмах его концентрация может превышать 10 г/л.

Для количественного определения концентрации фибриногена в условиях клинико-диагностических лабораторий наиболее применим метод Клаусса в основе которого лежит логарифмическая зависимость концентрации фибриногена в разведенной исследуемой плазме от lg времени образования сгустка после добавления к плазме тромбина высокой активности.

Перед регистрацией времени образования фибринового сгустка исследуемую плазму первоначально разводят буферным раствором в 10 раз, поскольку только в условиях высокой активности тромбина и низких концентраций фибриногена наблюдается линейная зависимость концентрации от времени образования фибрина. Такое разведение плазмы крови позволяет определять концентрацию фибриногена ориентировочно в диапазоне до 5,0 г/л. Этап разведения образца плазмы может отрицательно влиять на воспроизводимость метода.

Исключение этапа предварительного разведения пробы представляется целесообразным с позиции контроля качества исследований, и реализовано в модифицированном методе Клаусса используемого новой тест-системой «МультиТех-Фибриноген» производства фирмы « Технология –Стандарт». Модифицированный метод Клаусса позволяет исследовать концентрацию фибриногена в более широком диапазоне и исключить влияние этапа разведения пробы на правильность и воспроизводимость.

Метод может быть применен для определения концентрации фибриногена на коагулометрах с оптическим, оптико-механическим и механическим принципом регистрации образования сгустка.

Ниже приводятся результаты апробации и сравнения новой тест-системы с наборами реагентов для определения концентрации фибриногена других производителей.

Принцип метода заключается в определении времени свертывания цитратной плазмы избытком тромбина. Концентрация фибриногена определяется по калибровочной кривой, построенной в билогарифмической системе координат.

Подготовка реагентов к работе и проведение исследования приведены в инструкции к набору реагентов «МультиТех-Фибриноген».

Оценка результатов: Время свертывания исследуемого образца плазмы составляет 5-100 с, в зависимости от концентрации фибриногена и типа коагулометра. Диапазон определения концентрации фибриногена без дополнительного разведения составляет 0,9-10,0 г/л. Если результаты определения близки к 0,9 г/л или меньше (отсутствие регистрации сгустка), концентрацию фибриногена следует определить классическим методом Clauss набором реагентов «Тех-фибриноген-тест» (кат. № 094 или кат. № 324) или аналогичным с разведением плазмы 1:5. Концентрация фибриногена у здоровых людей находится в диапазоне от 2,0 до 4,0 г/л.

Результаты сравнительного тестирования набора реагентов «МультиТех-Фибриноген» с близкими по назначению наборами и различных коагулометрах

Калибровка тест-системы «МультиТех-Фибриноген» выполнена на коагулометрах с разным принципом регистрации времени образования сгустка с использованием набора «МультиТех-Калибратор», состоящего из 5 лиофилизированных образцов калибровочных плазм с концентрацией фибриногена 1.25, 2.2, 3.2, 5.5, 8.0 г/л. Калибровочные кривые, построенные для разных приборов, представлены на рис. Зависимость концентрации фибриногена от времени образования сгустка в билогарифмической системе координат приближается к прямой линии на всей области тестирования.

Рис. Калибровочные кривые, полученные при использовании набора «МультиТех-Фибриноген» на разных коагулометрах

Сравнение разных тест-систем проведено с использованием контрольной плазмы с концентрациями фибриногена 0,6; 1, 1; 2,3; 3,4; 5,6; 8,4 г/л . В таблице 1 приведены данные по стабильности определения КФ в плазме крови наборами реагентов разных фирм при проведении исследования по методу Клаусса с предварительным разведением плазмы 1:10, и использовании цельной плазмы, при проведении исследования по модифицированному методу.

ВАЖНО! Применение модифицированного метода Клаусса позволяет расширить диапазон уверенного определения КФ для разных типов коагулометров, особенно в области высоких концентраций, требующих дополнительного разведения пробы при классическом варианте метода.

Таблица 1.
Результаты определения КФ тест-системами разных производителей

источник

Вы можете добавить товар в корзину, указав количество

Производитель: Технология Стандарт

Вид упаковки: картонная коробка

Набор для быстрого количественного определения концентрации фибриногена в плазме крови (хронометрический метод по Клауссу) на коагулометре любой конструкции. Линейность определения от 1,0 до 6,0 г/л (без дополнительных разведений плазмы). Набор рассчитан на выполнение 100-200 анализов при расходе тромбина по 0,1-0,05 на 1 определение содержания фибриногена. Принцип метода заключается в определении времени свертывания разбавленной цитратной плазмы избытком тромбина. Время свертывания при этом пропорционально концентрации фибриногена, которую определяют по калибровочному графику. Коэффициент вариации результатов определения концентрации фибриногена не превышает 5%. Допустимый разброс результатов определения концентрации фибриногена в одной пробе плазмы разными наборами одной серии не превышает 10%

Тех-Фибриноген-тест предназначен для быстрого количественного определения содержания фибриногена в плазме крови (хронометрическим методом по Clauss) на коагулометрах всех имеющихся конструкций (как с оптическим, так и механическим принципом регистрации результатов) за исключением автоматов, которые требуют дополнительной настройки

Состав набора:
1. Тромбин (лиофильно высушенный реагент, 500 ед. NIH) — 2 флакона.
2. Растворитель для тромбина, 10,5 мл — 1 флакон.
3. Контрольная плазма с известным содержанием фибриногена (лиофильно высушенная) на 1 мл — 1 флакон.
4. Буфер трис-НСI (концентрированный 20:1 раствор, 1 М), 10 мл — 1 флакон.
Линейность определения от 1,0 до 6,0 г/л (без дополнительных разведений плазмы).
Коэффициент вариации результатов определения концентрации фибриногена не превышает 5%.
Допустимый разброс результатов определения концентрации фибриногена в одной пробе плазмы разными наборами одной серии не превышает 10%.
Все реагенты, входящие в набор, только для применения in vitro.
Хранение набора должно проводиться при температуре +2. 8°С в течение всего срока годности набора (24 месяца). Допускается транспортировка при температуре до +25°С в течение 30 суток, не замораживать.
Время использования набора не должно превышать 1 неделю с момента вскрытия его компонентов.
Раствор тромбина можно хранить при температуре +2. 8°С не более 3 дней; не замораживать.
Растворитель для тромбина после вскрытия флакона можно хранить при температуре +2. 8°С не более 1 недели; не замораживать.
Контрольную плазму после разведения можно хранить при комнатной температуре не более 3 часов или не более 1 недели при температуре -16. -20°С.
Рабочий раствор буфера можно хранить при температуре +2. 8°С не более 1 месяца.

Вся представленная на сайте информация, касающаяся технических характеристик, наличия на складе, стоимости товаров, носит ознакомительный характер и ни при каких условиях не является публичной офертой, определяемой положением пунктом 2 статьи 437 Гражданского кодекса Российской Федерации. Всю подробную информацию о товарах, их наличии и стоимости Вы можете получить у менеджеров отдела клиентского сервиса.

На данном сайте используются файлы cookie (куки) в целях совершенствования работы сайта и получения аналитической информации. В случае несогласия, просим произвести соответствующие настройки в браузере или покинуть данный сайт. Оставаясь на www.art-medika.com, Вы принимаете нашу политику конфиденциальности. Заполняя форму заявки, Вы подтверждаете свое согласие на обработку персональных данных.

© 2012-2019 Арт-Медика оборудование, реагенты, изделия медицинского назначения для клинической лабораторной диагностики

источник

Материалы публикуются для ознакомления, и не являются предписанием к лечению! Рекомендуем обратиться к врачу-гематологу в вашем лечебном учреждении!

Соавторы: Марковец Наталья Викторовна, врач-гематолог

Фибриноген — самый главный показатель свертываемости крови. Он синтезируется в печени и образуется в результате воздействия тромбина. Нормативное значение уровня фибриногена варьируется в пределах 2-4 грамм на литр крови. У беременных женщин и у новорожденных детей данный показатель несколько изменен. Любое отклонение от нормы свидетельствует о соответствующих патологических состояниях в организме.

Фибриногеном называют специфический белок плазмы крови, который синтезируется в печени. Он входит в группу анализов свертываемости. Этот белок необходим для нормального состояния гемостаза. Превращаясь в нерастворимый фибрин под воздействием тромбина, фибриноген образует некое образование (тромб), которое останавливает кровотечение, закрывая своими нитями поврежденную стенку сосуда.

Интересно! Если в составе плазмы крови фибриноген отсутствует, то она не свертывается. Такая плазма называется сывороткой.

У взрослого человека фибриноген находится на уровне 2-4 г/л. Норма фибриногена в крови у женщин в положении несколько увеличена −2-6 г/л, все зависит от срока беременности. У новорожденных данный показатель варьируется в пределах 1,3-3 г/л.

Узнать более подробно о норме фибриногена по неделям у беременных женщин можно в статье на нашем портале

В медицине фибриноген называют плазменным фактором гемостаза или свертывания, поэтому забор крови производят исключительно из вены. Пациентам назначают сдать кровь на коагулограмму (анализ свертываемости крови) или биохимию (биохимический анализ крови). Что это? Исследование производят в лаборатории. Венозную кровь помещают в специальную пробирку, где есть антикоагулянт. Спустя некоторое время скрининговые тесты гемостазиограммы специалисты лаборатории выдают лечащему врачу или пациенту. Чтобы расшифровать заключение лаборантов необходимо знать, какие компоненты в него входят:

  1. Фибриноген
  2. АЧТВ
  3. Протромбин
  4. Волчаночный антикоагулянт
  5. Тромбиновое время
  6. Тромбоциты
  7. Протромбиновое время
  8. Протромбиновый индекс
  9. ДВС-синдром и др.

Кальций представляет собой один из наиболее важных внеклеточных элементов организма. У данного минерала имеется целый ряд физиологических функций, среди которых проведение нервных сигналов, обеспечение свертываемости крови. Кальций также необходим как строительный материал скелету и мышечной ткани сердца. Поэтому его отклонения от нормы могут свидетельствовать о развитии различных заболеваний.

Еще один способ определения фибриногена в крови — исследование по Клаусу. К разведенной плазме добавляют большое количество тромбина и следят за скоростью образования сгустка. Таким образом исследуют уровень фибриногена в плазме.

Чтобы результат анализов был правдивым, нужно соблюдать определенные правила:

  • не принимать медицинские препараты, влияющие на свертываемость крови;
  • за 6-8 часов до исследования ничего не есть и не пить;
  • исключить физические нагрузки;
  • нормализовать прием пищи.

Если в биохимическом анализе крови или коагулограмме указан повышенный фибриноген, это может свидетельствовать о наличии тех или иных патологических состояниях:

  • острые воспалительные процессы;
  • инфекционные заболевания;
  • рак;
  • полиорганная недостаточность функции внутренних органов;
  • нарушение функции щитовидной железы;
  • заболевания, связанные с некрозом тканей и клеток;
  • хирургическое вмешательство;
  • обезвоживание организма;
  • прием эстрогенсодержащих противозачаточных средств и др.

Факт! Повышенный фибриноген в ряде случаев определяется в крови у пациентов пожилого возраста и у людей с вредными привычками (курение, алкоголь).

Отклонения фибриногена от нормы в положительную сторону можно корректировать, принимая фибринолитики, антикоагулянты, антиагреганты, витаминные препараты с большим содержанием никотиновой кислоты, витамина А, С, Е и др. Пациенты с повышенным уровнем фибриногена должны исключить из повседневного рациона холестериновые продукты и пищу с высоким содержанием жиров животного происхождения. Чтобы понизить фибриноген, врачи рекомендуют принимать в пищу фрукты, овощи, горький шоколад, морепродукты, какао. Народные целители советуют пить сок алоэ, отвар корня пиона и свежий сок каланхоэ.

Анизоцитоз — отклонение размеров форменных элементов крови от нормы. Это симптом, дающий неспецифическую клиническую картину. Но он значим и достоверен как доказательство нарушений в системе гемопоэза и/или иммунитета, поэтому его обнаружение требует комплексного обследования пациента.

Важно! Самостоятельно расшифровывать анализ крови на фибриноген и назначать себе лечение не стоит. Это должен делать специалист лаборатории или лечащий врач.

Пониженный фибриноген зачастую указывает на несбалансированность питания или нехватку витаминов С и В12. Также отклонение от нормы в меньшую сторону может говорить о циррозе печени, ДВС-синдроме, интоксикации ядами, гепатите или токсикозе. Отклонения в отрицательную сторону корректируются приемом специальных медикаментов и употреблением в пищу некоторых продуктов: картофеля, гречка, шпинат, яйца, орехи, бананы и др.

источник

Содержания фибриногена в плазме крови. Фибриноген – это предшественник фибрина, основного компонента кровяного сгустка. Представляет собой бесцветный белок, растворенный в плазме крови.

Фибриноген образуется в печени, время его жизни — около 4 суток (100 часов). Это гликопротеин с молекулярной массой 330 000-340 000 Да.

В организме человека фибриноген выполняет две основные задачи:

1. Участвует в процессе свёртывания крови в роли фактора свертывания I.

2. Участвует в воспалительных реакциях как белок острой фазы воспаления.

При активации процесса свертывания крови фибриноген под действием тромбина преобразуется в фибрин. Сначала от фибриногена отщепляются фибронопептиды А и В, которые являются основой фибрин-мономера. Затем в ходе реакции полимеризации фибринопептиды преобразуются в растворимый фибрин. Для перехода полученного фибрина в нерастворимую форму необходимы иона кальция, тромбин и фактор свертывания XIII. Нерастворимый фибрин образует тромб, который завершает процесс свёртывания крови.

В качестве белка острой фазы фибриноген участвует в воспалительных реакциях, он быстро реагирует на появление очага воспаления или некроза в тканях. Он влияет на скорость оседания эритроцитов (СОЭ) таким образом, что при повышении уровня фибриногена в крови СОЭ увеличивается.

Физиологическое повышение уровня фибриногена в крови отмечается при беременности, особенно в третьем триместре.

Скрининговая оценка состояния системы свёртывания крови.

Подготовка к оперативному вмешательству.

Заболевания сердечно-сосудистой системы.

Кровь на исследование сдают утром натощак, исключается даже чай или кофе. Допустимо пить обычную воду.

Временной интервал от последнего приёма пищи до сдачи анализа – не менее восьми часов.

Исключить физическую активность за 30 минут до забора крови.

Норма: 2,0 — 4,0 г/л.

Минимум, необходимый для гемостаза — 0,5 г/л.

1. Воспалительные процессы во внутренних органах:

  • в лёгких – пневмонии,
  • в почках – пиелонефрит острый и хронический, гломерулонефрит, нефротический синдром,
  • в брюшине – перитонит.

2. Реакции острой фазы заболеваний – лихорадка, острый инфаркт миокарда, ожоги, травматические повреждения, состояние после обширных хирургических вмешательств.

3. Диффузные заболевания соединительной ткани – склеродермия, узелковый периартериит, ревматоидный артрит, системная красная волчанка.

5. Некоторые злокачественные опухоли – рак лёгких.

6. Физиологическое повышение при беременности и менструации.

1. Наследственный дефицит фибриногена (афибриногенемия и гипофибриногенемия).

3. Состояние после острого кровотечения.

4. Отслойка плаценты при беременности.

6. Менингококковый менингит.

7. Рак простаты с метастазами в других органах.

8. Заболевания, сопровождающиеся поражением костного мозга – метастазы опухолей в костный мозг.

10. Острая и хроническая печеночная недостаточность.

11. Болезни печени при развитии печеночно-клеточной недостаточности – цирроз печени, отравление гепатотропными ядами.

12. Приём лекарственных препаратов (фенобарбитал, стрептокиназа, урокиназа).

Выберите беспокоящие вас симптомы, ответьте на вопросы. Выясните, насколько серьезна ваша проблема и нужно ли обращаться к врачу.

Перед использованием информации, предоставляемой сайтом medportal.org, пожалуйста, ознакомьтесь с условиями пользовательского соглашения.

Сайт medportal.org предоставляет услуги на условиях, описанных в настоящем документе. Начиная пользоваться веб-сайтом Вы подтверждаете, что ознакомились с условиями настоящего Пользовательского соглашения до начала пользования сайтом, и принимаете все условия данного Соглашения в полном объеме. Пожалуйста, не пользуйтесь веб-сайтом, если Вы не согласны с данными условиями.

Описание услуги

Вся информация, размещённая на сайте, носит справочный характер, информация взята из открытых источников является справочной и не является рекламой. Сайт medportal.org предоставляет услуги, позволяющие Пользователю производить поиск лекарственных средств в данных, полученных от аптек в рамках соглашения между аптеками и сайтом medportal.org. Для удобства пользования сайтом данные по лекарственным средствам, БАД систематизируются и приводятся к единому написанию.

Сайт medportal.org предоставляет услуги, позволяющие Пользователю производить поиск клиник и другой информации медицинского характера.

Ограничение ответственности

Размещенная в результатах поиска информация не является публичной офертой. Администрация сайта medportal.org не гарантирует точность, полноту и (или) актуальность отображаемых данных. Администрация сайта medportal.org не несет ответственности за вред или ущерб, который Вы могли понести от доступа или невозможности доступа к сайту или от использования или невозможности использования данного сайта.

Принимая условия настоящего соглашения, Вы полностью понимаете и соглашаетесь с тем, что:

Информация на сайте носит справочный характер.

Администрация сайта medportal.org не гарантирует отсутствия ошибок и расхождений относительно заявленного на сайте и фактического наличия товара и цен на товар в аптеке.

Пользователь обязуется уточнить интересующую его информацию телефонным звонком в аптеку или использовать предоставленную информацию по своему усмотрению.

Администрация сайта medportal.org не гарантирует отсутствия ошибок и расхождений относительно графика работы клиник, их контактных данных – номеров телефонов и адресов.

Ни Администрация сайта medportal.org, ни какая-либо другая сторона, вовлеченная в процесс предоставления информации, не несет ответственности за вред или ущерб, который Вы могли понести от того, что полностью положились на информацию, изложенную на этом веб-сайте.

Администрация сайта medportal.org предпринимает и обязуется предпринимать в дальнейшем все усилия для минимизации расхождений и ошибок в предоставленной информации.

Администрация сайта medportal.org не гарантирует отсутствия технических сбоев, в том числе в отношении работы программного обеспечения. Администрация сайта medportal.org обязуется в максимально короткие сроки предпринять все усилия для устранения каких-либо сбоев и ошибок в случае их возникновения.

Пользователь предупрежден о том, что Администрация сайта medportal.org не несет ответственности за посещение и использование им внешних ресурсов, ссылки на которые могут содержаться на сайте, не предоставляет одобрения их содержимого и не несет ответственности за их доступность.

Администрация сайта medportal.org оставляет за собой право приостановить действие сайта, частично или полностью изменить его содержание, внести изменения в Пользовательское соглашение. Подобные изменения осуществляются только на усмотрение Администрации без предварительного уведомления Пользователя.

Вы подтверждаете, что ознакомились с условиями настоящего Пользовательского соглашения , и принимаете все условия данного Соглашения в полном объеме.

Рекламная информация, на размещение которой на сайте имеется соответствующее соглашение с рекламодателем, имеет пометку «на правах рекламы».

источник

Способ получения фибриногена с использованием сильной анионообменной смолы и содержащий фибриноген продукт

Владельцы патента RU 2603103:

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены способ очистки фибриногена, содержащий фибриноген продукт и применение анионообменной смолы, содержащей гидроксилированный метакриловый полимер с привитыми через связывающую группу триметиламиногруппами, для получения указанного продукта указанным способом. Подвергают содержащий фибриноген источник хроматографии на анионообменной смоле на основе гидроксилированного метакрилового полимера с привитыми через связывающую группу триметиламиногруппами. Получают содержащий фибриноген продукт с высокой степенью чистоты без содержания вирусов и прионов с содержанием фибронектина 0,01-1,00 мкг/мг фибриногена, фибринопептида А 0,01-9,0 нг/мг фибриногена, с активностью vWF:Ag менее 0,1 МЕ/мг фибриногена, с активностью фактора XIII 0,07-1,0 МЕ/мг фибриногена и с активностью тромбина менее 0,007 МЕ/мг фибриногена. 3 н. и 15 з.п. ф-лы, 5 табл.

Уровень техники, к которому относится изобретение

Фибриноген, также известный как фактор свертывания крови I, играет ключевую роль в гемостазе и заживлении ран. Он является гликопротеином, синтезируемом в печени, с приблизительной молекулярной массой 340000 Да, состоит из двух димеров, каждый из которых составляют три пары неидентичных полипептидных цепей, называемых Aα, Bβ и γ, связанных дисульфидными мостиками. Он циркулирует в кровотоке в концентрации приблизительно 150-400 мкг/мл. При повреждении кровеносных сосудов активируются тромбоциты и образуется тромб. Фибриноген участвует в первичном гемостазе, способствуя связыванию активированных тромбоцитов.

Параллельно начинается активация каскада свертывания крови. На завершающем этапе фибриноген преобразуется в фибрин путем протеолитического высвобождения тромбином фибринопептида А и, медленнее, фибринопептида В. Растворимые мономеры фибрина объединяются в двухцепочечные скрученные фибриллы. Далее эти фибриллы организуются вдоль друг друга с образованием более толстых волокон. Затем эти волокна сшиваются FXIIIa в фибриновую сеть, которая стабилизирует тромбоцитарную пробку путем взаимодействий фибрина с активированными тромбоцитами, что приводит к стабильному тромбу.

Врожденная афибриногенемия представляет собой редкое нарушение свертываемости крови, при котором пациенты страдают от недостаточного свертывания крови вследствие отсутствия или нарушения функции фибриногена. Это медицинское состояние может приводить к случаям спонтанного кровотечения или обильным кровотечениям после незначительных травм или в ходе хирургических процедур.

Приобретенные дефициты фибриногена встречаются гораздо чаще, чем врожденная афибриногенемия, и могут индуцироваться гемодилюцией или другими событиями, такими как потеря крови во время хирургической операции, травма, диссеминированное внутрисосудистое свертывание или сепсис.

Дефицит фибриногена можно корректировать до нормальных уровней фибриногена в плазме приблизительно 1,5-3 г/л заместительной терапией с помощью внутривенной инфузии свежезамороженной плазмы или криопреципитата. Однако эти способы лечения сопряжены с риском занесения патогенов, например, вирусов или прионов, в организм пациента и, тем самым, возникновения дополнительных расстройств. Таким образом, рекомендуется внутривенно вводить композиции фибриногена, прошедшие вирусную инактивацию, для безопасного восстановления физиологических уровней фибриногена.

Несмотря на то, что существуют содержащие фибриноген препараты, которые называются фибриновым клеем, фибриногеновым адгезивом, тканевым клеем и т.п., эти препараты предназначены для местного применения в виде порошков, паст, пен или в комбинации с тканью в качестве пластыря для ран, они не пригодны для внутривенного применения, так как их консистенция и состав незамедлительно вызовут тромботические явления при инъекции. Эти препараты дополнительно содержат тромбин, соли кальция и относительно высокие количества фактора свертывания крови XIII. Примерами для таких препаратов являются US-A1-2008/003272, WO-A-95/22316 или US-A1-2008/181878.

Способы получения фибриногена описаны в EP-B1-1 240 200, который относится к способу очистки фибриногена из содержащего фибриноген раствора, включающему нанесение содержащего фибриноген раствора на ионообменную матрицу в условиях, при которых фибриноген связывается матрицей, промывание ионообменной матрицы буферным раствором, содержащим по меньшей мере одну ω-аминокислоту, элюирование фибриногена с матрицы буфером, содержащим 10 мМ Трис, 10 мМ цитрат, 45 мМ сахарозу и NaCl в концентрации от 200 мМ до 1,0 М, и необязательно выделение фибриногена из элюата.

Патентная заявка EP-B1-0 771 324 относится к способу получения свободного от вируса концентрата фибриногена, получаемого путем проведения в содержащей фибриноген разбавленной фракции плазмы химической обработки для инактивации вирусов, например, такой как обработка S/D или растворителем-детергентом, проведения осаждения полученной фракции после инактивации вирусов в растворе, содержащем аминокислоту при кислом значении рН, с получением супернатанта, фильтрации супернатанта с получением очищенного концентрата фибриногена и выделения очищенного концентрата фибриногена. Выделенный концентрат фибриногена подвергают обработке ультрафиолетовым излучением в качестве второй инактивации вирусов. Перед третьей инактивацией вирусов продукт стабилизируют и лиофилизируют.

В EP-B1-1 519 944 описано использование матрицы аффинной хроматографии с иммобилизованным металлом в условиях, при которых фибриноген и плазминоген связываются с матрицей, и селективного элюирования фибриногена и 93% плазминогена по отдельности с матрицы.

В EP-B1-0 555 135 описан способ получения фибриногена для внутривенного введения путем очистки раствора фибриногена на анионообменном геле на основе сшитой агарозы, содержащей четвертичные аминогруппы. Утверждается, что полученный фибриноген свободен от фактора VIIIc.

EP-B1-1 457 497 относится к способу удаления вирусов из растворов фибриногена, отличающемуся стабилизацией и замораживанием раствора и последующим его размораживанием. Отделение нерастворенных материалов происходит перед разбавлением белка, и после него следует нанофильтрация полученного раствора с использованием фильтров с размером пор менее 35 нм.

В US-A1-2006/0009376 также описан способ производства фибриногена. Его осуществляют после многократного растворения и осаждения фибриногена для удаления фактора свертываемости крови XIII.

Goheen S. C. et al., Journal of Chromatography A. 816 (1998) 89-96, описывают ВЭЖХ ионообменную хроматографию белков плазмы: альбумина, фибриногена и иммуноглобулина (G) на непористых материалах колонки, содержащих либо функциональные группы четвертичных аминов, либо сульфопропильные функциональные группы.

Одной из задач изобретения является предоставление концентрата фибриногена, произведенного с помощью специализированных стадий устранения и/или инактивации патогенов для устранения побочных реакций или предотвращения развития заболеваний, обусловленных патогеном. Указанные патогены выбраны из групп бактерий, вирусов и прионов, таких как прионный белок скрейпи (PrP SC ). Системное применение такого фибриногенового продукта внутривенным путем позволяет лечить врожденную афибриногенемию и приобретенные дефициты фибриногена. Применение этого стандартизованного концентрата фибриногена обеспечивает быстрое лечение в экстренных ситуациях без требующего времени размораживания свежезамороженной плазмы и снижение объемной нагрузки и надежные показатели свертываемости благодаря по существу постоянному составу.

Следующей задачей настоящей заявки является предоставление способа производства концентрата в промышленных масштабах, т.е. от нескольких сотен до тысяч литров исходного материала, такого как кровь или плазма крови, хотя также возможна мелкомасштабная продукция, т.е. от нескольких 1/10 литра до нескольких литров.

Эти и другие задачи решаются с помощью способа согласно пп.1-14 формулы изобретения и продукта, получаемого способом по настоящему изобретению в соответствии с пп.15-19 формулы изобретения.

В целом способ по изобретению для очистки или производства фибриногена из содержащего фибриноген сырья, включает стадии:

— формирование обогащенного фибриногеном преципитата путем добавления по меньшей мере одного осаждающего агента к содержащему фибриноген сырью;

— необязательно выделение обогащенного фибриногеном преципитата, например, путем центрифугирования указанного преципитата;

— отбор обогащенного фибриногеном преципитата в водную среду с получением содержащего фибриноген раствора, необязательно с последующей фильтрацией и/или ультра/диафильтрацией;

— проведение хроматографии содержащего фибриноген раствора с неподвижной фазой, имеющей сильные анионообменные группы, путем приведения в контакт указанного раствора с указанной фазой в условиях, при которых фибриноген связывается с указанной фазой;

— последующее элюирование фибриногена с неподвижной фазы с помощью водного раствора с более высокой ионной силой по сравнению с ионной силой предыдущей стадии с получением обогащенной фракции, которую собирают;

— необязательно последующие стадии разбавления и/или концентрирования обогащенной фибриногеном фракции;

— и необязательно заполнение обогащенной фибриногеном фракцией подходящих флаконов.

В одном из вариантов осуществления способа производства по изобретению содержащее фибриноген сырье выбрано из группы, состоящей из плазмы крови, фракций плазмы, таких как фракция I, или криопреципитат, культуры клеток, продуцирующих фибриноген, и/или супернатанты указанных культур клеток. Если в качестве исходного материала используется не криопреципитат, то в качестве исходного материала получают содержащий фибриноген промежуточный материал хорошо известными способами, такими как способы, описанные Cohn, Kistler-Nitschmann, и их модификации.

Для получения фармацевтически применимого продукта является преимущественным, чтобы содержащее фибриноген сырье подвергали способу инактивации вируса, например, способу с растворителем-детергентом.

В соответствии с другим вариантом осуществления изобретения инактивацию вирусов проводят перед формированием обогащенного фибриногеном преципитата. Однако также инактивацию вирусов можно проводить на другой стадии.

В соответствии с другим вариантом осуществления изобретения удаление инактивирующих вирусы веществ проводят путем масляной экстракции и/или хроматографии с сильными анионообменниками.

Типичный осаждающий агент для применения в способе производства по изобретению выбирают из группы, состоящей из аминокислот, таких как глицин, солей в высокой концентрации (высаливание) или пропиленгликоля.

В соответствии с другим вариантом осуществления изобретения отбор представляет собой ресуспендирование пасты в буфере, имеющем рН от 7,5 до 8,5.

В соответствии с другим вариантом осуществления изобретения неподвижная фаза имеет третичные или четвертичные аминогруппы.

Хроматографические стадии способа производства по изобретению, в частности, можно проводить на колонке.

Как правило, предназначенная для хранения форма заполненной обогащенной фибриногеном фракции находится в жидком состоянии, замороженном состоянии, предпочтительно при Изобретение относится к области биохимии. Предложен способ повышения клеточно-специфичной продуктивности рекомбинантного фактора VIII (rFVIII), продуцируемого в суспензионной культуре клеток млекопитающих в процессе культивирования указанной суспензионной культуры клеток млекопитающих в культуральной среде.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены способ очистки фибриногена, содержащий фибриноген продукт и применение анионообменной смолы, содержащей гидроксилированный метакриловый полимер с привитыми через связывающую группу триметиламиногруппами, для получения указанного продукта указанным способом. Подвергают содержащий фибриноген источник хроматографии на анионообменной смоле на основе гидроксилированного метакрилового полимера с привитыми через связывающую группу триметиламиногруппами. Получают содержащий фибриноген продукт с высокой степенью чистоты без содержания вирусов и прионов с содержанием фибронектина 0,01-1,00 мкгмг фибриногена, фибринопептида А 0,01-9,0 нгмг фибриногена, с активностью vWF:Ag менее 0,1 МЕмг фибриногена, с активностью фактора XIII 0,07-1,0 МЕмг фибриногена и с активностью тромбина менее 0,007 МЕмг фибриногена. 3 н. и 15 з.п. ф-лы, 5 табл.

источник

КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ ФИБРИНОГЕНА ПО МЕТОДУ

Количественное определение фибриногена является базисным тестом исследования гемостаза. Тест проводится при гиперфибриногенемиях, связанных с тяжестью воспалительных, иммуных, деструктивных процессов, с риском развития гипервискозного синдрома, артериальных тромбозов и инфарктов органов. Снижение концентрации фибриногена наблюдается при остром ДВС-синдроме, при лечении фибринолитиками, при врожденных гипо- и дисфибриногенемиях.

Фактор I свертывания крови — фибриноген (Mw-340 000 D) — является гликопро-теином и находится в растворенном состоянии в плазме крови и в тканях всех позвоночных животных. Образование фибрина и его стабилизация представляют собой финальный этап формирования тромба, при котором растворимый фибриноген превращается в нерастворимый фибрин под действием тромбина и фактора XIII.

Молекула фибриногена состоит из 6 полипептидных цепей: Аа2 Bb2 g2, связанных 29 дисульфидными связями. Образование из растворимого фибриногена нерастворимого полимера фибрина представляет собой высокоорганизованную последовательность взаимодействия целого ряда веществ. Механизмы этого процесса пристально изучаются уже более 40 лет, но до настоящего времени не все известно. Было установлено, что тромбин отщепляет от молекулы фибриногена А и В фибринопептиды, оставшиеся фибрин-мономеры начинают полимеризоваться, образуя сначала димеры, потом тетрамеры, олигомеры и так далее до образования полимера растворимого фибрина. В последней стадии растворимый фибрин стабилизируется ковалентными связями под действием ф. XIII и становится нерастворимым.

Фибриноген синтезируется в печени и имеет много функций: принимает участие как в свертывании крови, так и при агрегации тромбоцитов, определяет вязкость крови и влияет на взаимодействие форменных элементов крови с сосудистой стенкой. Фибриноген — это белок острой фазы, его концентрация увеличивается при острых ситуациях: травме, инфекции, воспалении, операции и т.п.

Концентрация фибриногена возрастает с возрастом, а также при ожирении, у больных атеросклерозом, сахарным диабетом, у курящих, при инфарке миокарда, канцерогенезе, нефрозе.

Возрастание в крови содержания фибриногена приводит к риску возникновения атеросклероза коронарных, мозговых и внемозговых артерий и к увеличению смертности. Все вышесказанное свидетельствует о необходимости точного определения содержания фибриногена в плазме крови. Разработаны различные методы определения фибри­ногена: кинетический, весовой, коагулометрический и др. Весовой метод основан на измерении фибриногена в фибриновом сгустке путем взвешивания последнего на торсионных весах (метод Рутберг). На растворении сгустка и количественном спектрофотометри-ческом определении белка основан метод Белицер и соавт. Следует отметить, что метод Рутберг достаточно прост в исполнении, но дает очень большую ошибку определения, и- результат тестирования напрямую зависит от умения лаборанта. Метод Белицера и соавт. более точен, но сложен и длителен по исполнению.

Метод Клаусса был предложен автором в 1957 г.

Принципметода основан на особенностях кинетики реакции фибриноген-тромбин, когда исследуемую плазму крови разбавляют в 10 раз с целью снижения влияния ингибиторов тромбина (антитромбина III и др.). В этих условиях при высоких концен­трациях тромбина и низких концентрациях фибриногена время реакции образования сгу­стка зависит только от количества фибриногена.

Метод Клаусса очень прост в исполнении, определяет только активный фибриноген, метод точен и стандартен, широко применяется за рубежом.

Единственный недостаток метода — невозможность работы ручным методом, т.к. образуемый сгусток плохо различим визуально. Однако любые механические или оптико-механические коагулометры позволяют получить точные и воспроизводимые результаты исследования фибриногена по Клауссу. Как показали наши исследования, в плазме доноров содержание фибриногена колеблется от 1,8 до 3,5 г/л. Для работы на оптических коа-гулометрах в инкубационную смесь вносят специально разработанный мелкодисперсный каолин.

Дата добавления: 2014-11-16 ; Просмотров: 463 ; Нарушение авторских прав? ;

Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет

источник

Фибриноген (фактор I) – белок, который вырабатывается в печени и превращается в основу сгустка при свертывании крови – в фибрин. Анализ на фибриноген выполняется в рамках коагулограммы или ревматологических проб. Его результаты необходимы для оценки способности организма к тромбообразованию, выявления связанных с этим процессом нарушений: наследственной афибриногемии, гипофибриногемии, хронических заболеваний печени, истощения организма, воспалительных процессов. Также анализ назначается при подготовке к операции, во время беременности. Забор крови производится из вены, исследование проводится методом детекции бокового светорассеяния, определения процента по конечной точке. Референсные значения – 1,8-3,5 г/л. Сроки подготовки результатов не превышают 1 рабочего дня.

Фибриноген (фактор I) – белок, который вырабатывается в печени и превращается в основу сгустка при свертывании крови – в фибрин. Анализ на фибриноген выполняется в рамках коагулограммы или ревматологических проб. Его результаты необходимы для оценки способности организма к тромбообразованию, выявления связанных с этим процессом нарушений: наследственной афибриногемии, гипофибриногемии, хронических заболеваний печени, истощения организма, воспалительных процессов. Также анализ назначается при подготовке к операции, во время беременности. Забор крови производится из вены, исследование проводится методом детекции бокового светорассеяния, определения процента по конечной точке. Референсные значения – 1,8-3,5 г/л. Сроки подготовки результатов не превышают 1 рабочего дня.

Фибриноген – гликопротеин, который синтезируется гепатоцитами и выделяется в кровь; является I фактором свертывания крови. Когда кровеносный сосуд повреждается, фибриноген при участии ферментов преобразуется в фибрин – высокомолекулярный белок, который полимеризируется и вместе с тромбоцитами и эритроцитами, образует кровяной сгусток, препятствующий кровотечению. После восстановления сосудистой стенки тромб распадается. Изменение концентрации фибриногена в крови и его активности проявляются кровотечением, тромбозом или сочетанием двух типов нарушений свертываемости.

Материалом для проведения теста на фибриноген является плазма венозной крови. Определение содержания этого белка производится через оценку скорости образования сгустка после добавления избытка тромбина в разбавленный образец материала. Регистрация показателей осуществляется автоматически, методом детекции бокового светорассеяния. Анализ крови на фибриноген находит широкое применение в клинической практике. Его результаты используются в гематологии при диагностике патологий свертываемости крови, в хирургии они необходимы в рамках предоперационной подготовки, в акушерстве и гинекологии – при выявлении рисков прерывания беременности и установлении причин бесплодия, в кардиологии – при подозрении на сердечно-сосудистые заболевания. Концентрация фибриногена в крови растет при воспалительных процессах и повреждениях тканей, поэтому исследование применяется в ревматологии, инфекционистике, токсикологии, травматологии.

Анализ крови на фибриноген в комплексе с тестами на АЧТВ, тромбиновое время, протромбин и МНО показан при патологиях свертываемости крови. Результаты используются для диагностики I стадии ДВС-синдрома, гипо- и дисфибриногенемий, тромбозов, тромбоэмболий. Исследование назначается при наличии таких симптомов, как повышенная кровоточивость слизистых, значительные потери крови при небольших травмах, длительные и обильные менструальные кровотечения, появление сосудистой сетки или узлов на конечностях, боли в ногах. Для предупреждения больших кровопотерь тест на фибриноген выполняется в ходе подготовки к операциям, родам, инвазивным диагностическим процедурам.

В пренатальной диагностике анализ проводится для выявления риска самопроизвольного прерывания беременности в I триместре и преждевременных родов, для диагностики ранней отслойки плаценты, гестоза, тромбоза пуповинных сосудов. Анализ на фибриноген нередко проводится в комплексе ревматических проб – его количество в крови растет при воспалениях и некрозе тканей, поэтому анализ назначается в комплексной диагностике инфекционных и аутоиммунных заболеваний, инсульта, гипотиреоза, пневмонии, злокачественных опухолей, отравлений.

Анализ на содержание фибриногена в крови не показан для оценки риска развития сердечно-сосудистых заболеваний у пациентов, не входящих в группу риска по патологиям свертываемости крови. Уровень этого белка быстро растет при повреждении тканей и развитии воспаления, поэтому анализ крови позволяет на ранней (доклинической) стадии выявить патологический процесс. Ограничением этого теста является его недостаточная информативность при определении причин повышения показателей: для того, чтобы выяснить, чем вызваны такие изменения – воспалением, некрозом тканей, опухолью – необходимо проведение дополнительных исследований.

Материалом для исследования является плазма, полученная из венозной крови. Процедура забора, как правило, выполняется с утра. За 12 часов до анализа нужно воздержаться от приема пищи, разрешено пить чистую воду. В течение получаса стоит избегать физических нагрузок, эмоционального перенапряжения, полностью исключить курение. Прием некоторых препаратов влияет на достоверность результата, поэтому за неделю до исследования их нужно отменить либо предупредить о лечении врача, выдающего направление на анализ.

Забор крови выполняется методом венепункции. Материал собирают в пробирку с цитратом натрия – антикоагулянтом, который препятствует преждевременному образованию сгустков. В течение 2–6 часов кровь направляется в лабораторию, где ее центрифугируют, отделяя плазму. Чаще всего исследование проводится методом Клауса. Для воссоздания последнего этапа коагуляции в пробирку с разведенной в 10 раз плазмой добавляют тромбин высокой активности. Расчет концентрации фибриногена выполняется автоматически на коагулометрах с механическим и оптическим типом детекции образования сгустка. Существуют и другие методы исследования фибриногена: классический и модифицированный по Клаусу, иммунологический анализ, электрофорез. Подготовка результатов анализа занимает не более 1 рабочего дня.

В норме количество фибриногена в образце плазмы крови колеблется от 2 до 4 г/л. Минимальное количество этого белка, необходимое для обеспечения гемостаза – 0,5 г/л. В период беременности референсные значения изменяются в зависимости от срока: с 1 по 13 неделю – 2,12–4,33 г/л; с 13 по 22 неделю – 2,9–5,3 г/л; с 21 по 35 неделю – 3–5,7 г/л; с 35 по 42 неделю – 3,5–6,5 г/л. Постепенное увеличение концентрации фибриногена связано с подготовкой организма к родам и возможным кровопотерям.

Естественное снижение фибриногена наблюдается у пациентов после переливания большого объема крови. Повышенные значения определяются при ожирении, курении, после физической нагрузки и эмоционального стресса, а также при заболеваниях, сопровождающихся повышенным уровнем сахара или холестерина в крови.

Стойкое повышение количества фибриногена в кровяном русле происходит при заболеваниях, в основе которых лежит нарушение гемостаза – тромбозы, тромбоэмболии. Часто причиной становится патология периферических сосудов: атеросклероз артерий ног, варикозное расширение вен, облитерирующий эндартериит нижних конечностей, тромбофлебит. Повышение концентрации фибриногена может быть вызвано воспалением или повреждением тканей: злокачественными опухолями, инфарктом миокарда, амилоидозом, пневмонией, гриппом, туберкулезом, гипотиреозом, панкреатитом, фарингитом, пиелонефритом, ревматоидным артритом, мононуклеозом, отравлениями и ожогами. Некоторое увеличение концентрации этого белка происходит при приеме оральных контрацептивов и эстрогенов.

Причиной снижения уровня фибриногена в крови являются патологии свертываемости крови, такие как гипо- и афибриногенемия, ДВС-синдром. К уменьшению синтеза, а, следовательно, и концентрации этого белка приводят заболевания печени – гепатит, цирроз, печеночная недостаточность, в том числе на фоне интоксикаций. Хроническое умеренное отклонение показателей теста наблюдается при токсикозе, дефиците витаминов C и В12, миелолейкозе, полицитемии, сердечной недостаточности. Уровень фибриногена в крови снижается при переливаниях крови, укусах ядовитых змей, приеме стероидных анаболических средств, фенобарбитала, стрептокиназы, урокиназы, вальпроевой кислоты.

Анализ на фибриноген в крови широко распространен в клинической практике: он используется для диагностики и мониторинга патологий, связанных с нарушением свертываемости крови, а также воспалительных, в том числе инфекционных и аутоиммунных, заболеваний. При отклонении результатов теста от нормы за лечением необходимо обратиться к врачу, выдавшему направление на исследование – к гематологу, гинекологу, инфекционисту, гастроэнтерологу, кардиологу. Незначительные отклонения от нормы можно скорректировать, придерживаясь здорового образа жизни. Стоит отказаться от курения, алкоголя, бесконтрольного приема лекарств, составить рацион, содержащий достаточное количество витаминов и микроэлементов.

источник

1 Определение концентрации фибриногена в клинико-диагностической лаборатории Бирюля Диана Геннадьевна ООО фирма «Технология-Стандарт»

2 Фибриноген гликопротеин плазмы крови синтезируется в печени в количестве 2-5 г в день, время его полувыведения около 4-х дней Функции: образование фибринового сгустка, заживление ран, фибринолиз, воспаление, ангиогенез, клеточное и структурное взаимодействие, неоплазия Референтные значения 2,0-4,0 г /л концентрация может увеличиться на % во время физиологического стресса

3 сложный гликопротеин, состоящий из трех пар полипептидов:α,β и ϒ полипептиды связаны друг с другом 29 дисульфидными связями

4 Клинико-диагностическое значение Гиперфибриногенемия повышение уровня фибриногена в крови. Является фактором повышенного риска развития артериальных тромбозов и инфарктов органов. Физиологическое: холодное время года, беременность, менструация, постменопауза Патологическое повышение: Реакции острой фазы (лихорадка, инфекционные болезни, воспалительные и некротические процессы; травмы, ожоги, хирургические операции). Злокачественные опухоли, метастазирование Курение Оральные контрацептивы

5 Клинико-диагностическое значение Гипофибриногенемия снижение концентрации уровня фибриногена в крови. Наследственный дефицит фибриногена (а- и дисфибриногенемия) ДВС-синдром (синдром диссеминированного внутрисосудистого свертывания) Гемодилюция кровезаменителями Декомпенсированные болезни печени (вирусные гепатиты, цирроз) Уменьшение содержание фибриногена плазмы до уровня ниже 1 г/л служит фактором риска появления кровотечений из сосудов внутренних органов

6 Историческая справка R. Wirchow в 1847 году предположил, что существует некий растворимый предшественник в плазме, из которого и формируется кровяной сгусток в 1859 году Deni de Commercy впервые предложил для этого предшественника термин «фибриноген» в 1876 году выделен Олафом Хаммарстен (Швеция) из плазмы лошадей В 1904 году А. Шмидт наряду с тромбином определил центральную роль F I в коагуляционном каскаде В 1909 году, фибриноген впервые был выделен в хорошо очищенном виде

7 Методы определения концентрации фибриногена в крови Нефункциональные методы: высаливания или тепловой преципитации фибриногена с последующим количественным исследованием коагулята (объемным методом, фотометрией) образование стабильного фибрина с последующим выделением и взвешиванием фотометрическое определение после растворения фибрина при помощи биуретового реактива иммунологический метод Функциональные методы определение по Клауссу с тромбином турбидиметрическая модификация c батроксобином

8 Данный этап практически невозможно сделать стандартным. Сильное отжимание сгустка — приводит к потерям фибрина Слабое отжимание — к ложному завышению уровня фибриногена Определение содержания весовым (гравиметрическим) методом по Рутберг Р.А. Принцип. Образовавшийся после свертывания плазмы крови фибрин быстро высушивается, и по весу определяют содержание фибриногена в плазме. Реактивы:1. Хлорид кальция, 5% раствор; 2. Эмульсия тканевого тромбопластина на трис-буфере, 0,05 М (или буфере Михаэлиса), рн 7,3-7,4 Материал для исследования: цитратная плазма. Ход определения: К 1,0 мл плазмы в пробирке последовательно добавляют 0,1 мл эмульсии тромбопластина (или раствор тромбина) и 0,1 мл 5% р-ра хлорида кальция. Реагенты перемешивают стеклянной палочкой. Палочку оставляют в пробирке. Смесь инкубируют в термостате с прозрачными стенками (ТПС) или на водяной бане (37 С) мин, после чего образовавшийся сгусток переносят на фильтровальную бумагу и высушивают путем сжатия и перемещения сгустка по бумаге. Сгусток фибрина взвешивают на торсионных весах. В норме масса сгустка фибрина составляет 9 18 мг. Расчет: для определения концентрации фибриногена, выраженной в г/л, массу фибрина в мг умножают на коэффициент 0,222. Фибриноген в г/л = мг фибрина 0,222 Норма в плазме: 2 4 г/л Сгусток может быть рыхлым вследствие наличия ингибиторов тромбообразования Большой объем используемой плазмы ограничивает использование в педиатрии Экономичен Данный этап практически невозможно стандартизировать! Сильное отжимание — приводит к потерям фибрина Слабое отжимание — к ложному завышению уровня фибриногена Максимальный контакт персонала с кровью

9 Иммунологические методы определения концентрации фибриногена и электрофрез иммуноферментный анализ (ELISA) радиальная иммунодиффузия иммунонефелометрии электрофорез Измерение концентрации белка, а не его функциональной активности Занимает много времени Ложные результаты при наличии ПДФ Использование моноклональных антител к разным антигенам фибриногена позволяет выявлять функциональные формы Рекомендован к использованию для оценки риска кардиоваскулярных заболеваний Fibrinogen antigen measurement is suitable for studies assessing fibrinogen as a risk factor for cardiovascular disease (Cremer et al, 1994; Sweetnam et al, 1996, 1998)

10 Определение концентрации фибриногена в протромбиновом тесте (PT derived Fibrinogen) Анализатор калибруется при исследовании протромбинового время плазмы (или серии разведений плазмы) с известной концентрацией фибриногена и построения графиков изменения оптической плотности по отношению к концентрации фибриногена в логарифмических шкалах Применение PT-Fg метода обеспечивает быстрое измерение фибриногена без каких-либо дополнительных затрат Метод применим только на автоматических анализаторах Результаты зависят от метода калибровки, типа анализатора и реагентов, и оптической прозрачности пробы Не рекомендован к применению у больных с ДВС, заболевания печени, заболевания почек, дисфибриногенемией, с высоким или низким уровнем фибриногена получавших антикоагулянты, тромболитической терапией Guidelines on fibrinogen assays British Journal of Haematology, 2003, 121, Корреляция с методом Clauss нелинейная (сигмовидная)

11 Метод Сlauss Clauss, A. (1957) Gerinnungsphysiologische schnellmethode zur bestimmung des fibrinogens. Acta Haematologica, 17, К плазме крови добавляют тромбин высокой активности и измеряют время образования сгустка. Расчет концентрации фибриногена проводят по калибровочной кривой построенной в логарифмических шкалах. Для исследования используют плазму крови разведенную буфером в 10 раз. Диапазон значений при стандартном разведении плазмы от 1 до 5 г/л Выполняется на коагулометрах с механическим и оптическим типом детекции образования сгустка Метод рекомендован для разных групп пациентов Построение калибровочных кривых позволяет адаптировать любой прибор к набору реагентов Дополнительные разведения образца необходимы если превышен диапазон линейности Малочувствителен к гепарину в терапевтических дозах и ПДФ Исследование может быть выполнено на коагулометре с любым вариантом регистрации образования сгустка

12 Классический метод Clauss ПЛАЗМА КРОВИ + БУФЕР ПЛАЗМА разведение 1:9 этап предварительного разведения плазмы ТРОМБИН Диапазон линейности метода от 1 до 5 г/л фибриногена Время образования сгустка от 4 сек иследование только на коагулометре

13 Модифицированный метод Clauss Нет этапа предварительного разведения плазмы ПЛАЗМА ТРОМБИН Диапазон линейности метода от 1 до 10 г/л фибриногена

14 Наборы реагентов модифицированного метода CLAUSS в России Барнаул

15 Калибровка 100 Время, сек 10 STart-4 CoaData KC 4D АПГ Концентрация фибриногена, г/л

источник

При повреждении кровеносных сосудов на месте травмы образуется сгусток, состоящий из клеток крови. В процессе свертывания участвует большое количество компонентов. Фибриноген играет одну из ключевых ролей при остановке кровотечения. Изменение концентрации этого вещества в организме под действием разных факторов, при некоторых заболеваниях может нарушить свертываемость крови. Повышенное образование тромбов или непрекращающиеся кровотечения создают угрозу для здоровья и жизни человека.

Фибриноген – это крупные многокомпонентные молекулы белка, растворенные в крови. Плазма после удаления этого вещества называется сывороткой. Белок производится печенью, циркулирует в организме 3-5 дней, затем старые частицы утилизируются, на смену им синтезируются новые. Фибриноген находится в неактивной форме до тех пор, пока не запускается система свертывания крови при нарушении целостности сосуда, воспалениях.

При появлении повреждений растворимый фибриноген (фактор I свертывания крови) под действием выделившегося фермента тромбина превращается в элементы нерастворимого фибрина. Фактор XIII свертывания вызывает объединение мономеров в более объемные структуры. Нити фибрина-полимера прикрепляются к краям раны и как сеть задерживают клетки крови, не позволяя им покидать сосудистое русло. Эритроциты и лейкоциты прилипают к ним, образуя сгусток крови.

Далее под действием тромбостенина активированные тромбоциты, прикрепленные к нитям фибрина, сжимаются. Сгусток крови уплотняется, происходит его рестрикция, из него выталкивается жидкость. Вследствие этого края раны сближаются. Общее время образования тромба у здорового человека составляет 10-20 минут. По мере заживления раны осуществляется рассасывание кровяного сгустка при участии тромбоцитов.

Фибриноген выполняет ряд важных задач для обеспечения нормальной жизнедеятельности организма. Например, он:

  • участвует в образовании нитей фибрина при повреждении сосудов;
  • регулирует фибринолиз (рассасывание тромбов);
  • принимает участие в ангиогенезе (образовании новых капилляров);
  • участвует во взаимодействии клеток крови со стенками сосудов;
  • ускоряет восстановление тканей после повреждения;
  • регулирует воспалительные процессы.

Установлены нормальные показатели концентрации фибриногена в крови, свидетельствующие об отсутствии патологий системы гемостаза. Они представлены в таблице:

Взрослые женщины и мужчины

Увеличение содержания фибриногена (фибринемия) является значимым показателем для диагностирования ряда заболевании, свидетельствует об активации системы гемостаза. При подъеме уровня этого белка выше 4 г/л могут запускаться процессы тромбообразования, вызывающие негативные последствия. Исключение составляют беременные женщины, нормальный показатель у которых завышен. Увеличение свертываемости крови приводит к серьезным нарушениям сердечно-сосудистой системы. При этом повышается скорость оседания эритроцитов (СОЭ или РОЭ).

Исследования показали, что система свертывания очень чутко реагирует на изменения состояния организма. Фибриноген повышен при:

  • воспалительных, инфекционных и аутоиммунных заболеваниях – гриппе, фарингите, панкреатите, перитоните, пиелонефрите, гломерулонефрите, пневмонии, ревматоидном артрите, мононуклеозе, склеродермии;
  • нарушениях кровообращения в мозгу, конечностях – атеросклерозе рук и ног, тромбофлебите, ангиопатии, венозной недостаточности;
  • онкологических заболеваниях, множественной миеломе;
  • инсульте, инфаркте миокарда;
  • нефротическом и гемолитико-уремическом синдроме;
  • сахарном диабете, гепатите, туберкулёзе;
  • гипотиреозе, амилоидозе;
  • ожогах, травмах;
  • гиперфибриногенемии;
  • некрозе тканей, лучевой болезни;
  • никотиновой зависимости;
  • при беременности и менструации у женщин;
  • после хирургического вмешательства;
  • на первой стадии ДВС-синдрома;
  • у людей пожилого возраста.

Повышенная концентрация белка в крови вызывает образование тромбов даже при отсутствии повреждений. Это может стать причиной развития ишемической болезни сердца, закупорки сосудов фибриновыми сгустками, сердечной недостаточности, инфаркта и инсульта. Кровь становится более густой, вязкой, что опасно при гипертонии, в пожилом возрасте.

Для корректировки уровня фибриногена врач индивидуально подбирает схему лечения с учетом причин, вызывающих данное отклонение. Существует несколько групп препаратов, различающихся по механизму действия на систему крови. Выделяют следующие антикоагулянты:

  • предотвращающие действие фермента тромбина на фибриноген (Гепарин);
  • частично ингибирующие синтез протромбина клетками печени (Варфарин, Дикумарин);
  • тромболитики, растворяющие уже образовавшийся тромб (Альтеплаза);
  • ингибиторы фактора X свертывания (Ксарелто (Ривароксабан), Прадакса);
  • продукты питания, способствующие разжижению крови и снижению ее свертываемости (ягоды клюквы, малины, куркума, ананас, лимон, отвар и настойка корня солодки, зеленый чай, льняное масло, свекла, огурцы, чеснок, какао-бобы, горький шоколад, жирная рыба, сок алоэ);
  • витамины А, С, Е, В3, В5 как дополнительные средства.

Снижение уровня фибриногена также свидетельствует о развитии патологических процессов. Свертываемость крови уменьшается. В тяжелых состояниях даже мелкие капиллярные кровотечения могут длительное время не останавливаться. Это ведет к появлению головокружения, слабости, потере сознания. Снижение концентрации данного белка до 2 г/л является противопоказанием для проведения хирургических операций; менее 1 г/л говорит о риске внутренних кровотечений.

Установлено, что фибриноген понижен при патологиях различных органов. Показатели ниже допустимого порога наблюдаются при:

  • нарушениях функционирования печени (циррозе, печеночной недостаточности);
  • отравлениях некачественной пищей, лекарственными средствами, бытовой химией, ядами;
  • инфекционном мононуклеозе, менингококковом менингите;
  • токсикозе при беременности;
  • осложнениях после родов;
  • ДВС-синдроме (наличии большого количества микротромбов);
  • сердечной недостаточности;
  • при образовании метастазов при онкологии;
  • гемобластозах (лейкозе промиелоцитарного типа, хроническом миелобластном лейкозе);
  • гипо- и авитаминозе (нехватке витаминов С и В12);
  • афибриногенемии, гипофибриногенемии (генетических заболеваниях, вызывающих недостаточность фибриногена);
  • полицитемии (увеличении количества клеток крови);
  • после кровопотери;
  • после тромболизиса под наблюдением врача;
  • у детей до 6 месяцев;
  • у новорожденных при эмболии околоплодными водами;
  • у вегетарианцев;
  • при регулярном приеме алкогольных напитков.

Увеличить концентрацию фибриногена можно с помощью приема лекарственных средств и соблюдения диеты, включающей определенные компоненты. Примерный перечень препаратов и продуктов:

Аминокапроновая кислота (внутривенно),

Транексам (транексамовая кислота),

При беременности концентрация фибриногена постепенно повышается. Это нормальное явление, свидетельствующее о подготовке организма к рождению ребенка, служит защитой от больших кровопотерь в родах. Для наблюдения за нормальным протеканием беременности анализ на свертываемость сдают каждые 3 месяца. Норма фибриногена в крови у женщин в период беременности:

Понижение свертываемости крови может спровоцировать сильное кровотечение во время родов. Повышенный уровень фибриногена при беременности вызывает серьезные осложнения:

  • отслойку плаценты на ранних сроках;
  • гестоз;
  • выкидыш на ранних сроках;
  • образование тромбов в сосудах пуповины;
  • замирание беременности;
  • роды раньше срока;
  • тромбофлебит, тромбоз у матери.

Для определения свертываемости крови проводят специальное исследование, в результате которого получают коагулограмму, предоставляющую информацию о концентрации фибриногена. Данный анализ назначают при наличии следующих показаний:

  • перед и после хирургического вмешательства;
  • при наличии болезней печени, сердца, сосудов;
  • после случая тромбоза сосуда;
  • во время беременности;
  • при невыясненных причинах воспалительных процессов;
  • при подозрении на наличие гемофилии.

Для исследования сдают венозную кровь натощак, после последнего приема пищи должно пройти не менее 12 часов. За два часа до взятия материала стоит убрать физические нагрузки, за 40 минут – прекратить курить. К пробе добавляют 3,8%-ный раствор цитрата натрия, чтобы не допустить переход фибриногена в фибрин. Прежде, чем сдавать кровь на биохимический анализ, стоит учитывать, что некоторые факторы и препараты искажают результаты в ту или иную сторону. В некоторых случаях требуется прекратить их применение перед исследованием.

Употребление определенных лекарственных средств (анаболиков, андрогенов, антикоагулянтов, антиоксидантов, Урокиназы, Фенобарбитала, Вальпроевой кислоты) и переливание крови снижают концентрацию фибриногена. Стрессовые состояния, физические нагрузки, лишний вес, высокий уровень глюкозы и холестерина, употребление оральных контрацептивов обуславливают более высокие показатели свертываемости. У пациентов, страдающих на момент обследования ринитом, ангиной, простудными заболеваниями, результаты не могут считаться достоверными.

Фибриноген в анализе крови (коагулограмме) по Клауссу указывается в первой строчке, имеющей название FIB.CLAUSS, FIB или RECOMBIPL-FIB. Помимо него в бланке результатов обозначены АЧТВ (активированное частичное тромбопластиновое время), ПТВ (протромбиновое время), ПТИ (протромбиновый индекс), МНО (международное нормализованное отношение).

Для расшифровки анализа используются два столбика таблицы с показателями: в одном из них указан полученный в ходе исследования результат, в другом – референсные значения (т.е. норма). Нужно сравнить данные пациента с установленными для здоровых людей числами. В случае если показатель фибриногена обследуемого человека попадает в интервал нормальных значений, считается, что патологий системы свертываемости не выявлено. При отклонении данных от нормы врач может назначить дополнительные исследования, на основе которых будет определен диагноз и последующее лечение.

источник



Источник: technohouse-market.ru


Добавить комментарий